離心機的相關(guān)知識介紹
離心機的相關(guān)知識介紹離心技術(shù)主要用于各種生物樣品的分離和制備,生物樣品懸浮液在高速旋轉下,由于巨大的離心力作用,使懸浮的微小顆粒(細胞器、生物大分子的沉淀等)以一定的速度沉降,從而與溶液得以分離,而沉降速度取決于顆粒的質(zhì)量、大小和密度。
● 相對離心力(RCF)
又稱(chēng)為(g)力是在離心過(guò)程中實(shí)際施加在樣品上的作用力。
RCF=1.18x離心半徑(mm)x(轉速/1000)2
在離心過(guò)程中能夠直接設定離心力離心,可以使結果更加準確、可靠,更具有科學(xué)性。
● 轉速(rpm)
通常以每分鐘多少轉來(lái)表示。相對離心力與轉子轉速的平方成正比。因此,轉速是決定離心力的主要因素。
● 離心半徑
指轉子中軸到樣品管中心的距離,離心半徑與離心力成正比。不同的轉子具有不同的離心半徑。不同廠(chǎng)家相同容量的離心機轉子半徑不同,相同的轉速所得到的離心力也不同,對RCF會(huì )產(chǎn)生很大影響。
綜上所述:轉速、離心半徑均對離心力產(chǎn)生較大影響,在實(shí)際使用過(guò)程中,能夠直接設定離心力,就可以把影響降到zui小。
離心機的相關(guān)知識介紹II 離心效果
● 離心積分
相對離心力和離心時(shí)間是決定離心效果的關(guān)鍵因素。但無(wú)法僅用這兩個(gè)參數來(lái)準確衡量離心效果。使用離心積分(HRF)來(lái)衡量離心效果。
離心積分是指離心過(guò)程中離心力對離心時(shí)間的積分。離心積分考慮了離心過(guò)程中各種影響因素對離心加速的影響,保證施加于樣品的離心力總量一致,從而保證一致的離心效果。離心積分還表明:短時(shí)間的高速離心和長(cháng)時(shí)間的低速離心可以獲得相同的離心效果。
● 差速離心
差速離心法是利用樣品中各種組分的沉降系數不同而進(jìn)行分離的方法,又稱(chēng)差分離心或差級離心。通常兩個(gè)組分的沉降系數差在10倍以上時(shí)可以用此法分離。在差速離心中細胞器沉降的順序依次為:核、線(xiàn)粒體、溶酶體與過(guò)氧化物酶體、內質(zhì)網(wǎng)與高基體、zui后為核蛋白體。沉降系數差別在一個(gè)或幾個(gè)數量級的顆粒,可以用此法分離
差速離心首先要選擇好顆粒沉降所需的離心力和離心時(shí)間,應用方式與學(xué)科:
1:分步改變離心速度,用不同強度的離心力使具有不同密度的物質(zhì)分批分離的方法。
應用學(xué)科:生物化學(xué)與分子生物學(xué)(一級學(xué)科);方法與技術(shù)(二級學(xué)科)
2:利用不同物質(zhì)沉降速率的差異,在不同離心速度下分離和收集不同顆粒的離心技術(shù)。常用于分離細胞勻漿中的各種細胞器。
應用學(xué)科:細胞生物學(xué)(一級學(xué)科);細胞生物學(xué)技術(shù)(二級學(xué)科)
差速離心法的優(yōu)點(diǎn)是樣品的處理量較大,用于大量樣品的初分離,可使用容量較大的轉子
III 安全離心
操作者的安全防護
樣品與轉子在高速離心狀態(tài)下會(huì )產(chǎn)生巨大的離心力,因此對使用者的安全保護是離心機設計的首要因素。
● 需用高強度材料
【1】 環(huán)氧涂層鋼制材料:抵抗各種溶劑和碎片的侵蝕。
【2】 鋼制結構,不銹鋼腔:高強度,抗腐蝕
【3】 盔甲電鍍:當轉子或吊桶碎裂是,能夠起到保護腔體作用
● 不平衡保護,不平衡時(shí)自動(dòng)停機,自動(dòng)失衡識別。
● 轉子自動(dòng)識別【高速離心機】,超速保護。防止使用者誤操作導致危險的發(fā)生
● 自動(dòng)平衡,無(wú)需配平
● 保證轉子高速運轉時(shí)突然發(fā)生軸斷裂時(shí):
【1】 轉子不會(huì )飛出
【2】 離心力外表看不成變形
【3】 斷電后能正常開(kāi)蓋
【4】 內腔體變形不超過(guò):3mm
【5】 離心機在試驗臺上不發(fā)生水平位移
● 使用者需與離心機保持至少30cm的安全距離
● 溫度控制,保證生物樣品活性
離心常見(jiàn)的溫度設定為:4℃,20, 37℃ ,其中以4℃(生物零度)zui為重要,這就要求離心機具備預制冷功能、定溫啟動(dòng)功能,保證樣品一放入就處于安全溫度下離心。
離心機的相關(guān)知識介紹目前,實(shí)驗室常用的是電動(dòng)離心機
電動(dòng)離心機轉動(dòng)速度快,要注意安全,特別要防止在離心機運轉期間,因不平衡或試管墊老化,而使離心機邊工作邊移動(dòng),直致從實(shí)驗臺上掉下來(lái),或因蓋子未蓋,離心管因振動(dòng)而破裂后,玻璃碎片旋轉飛出,造成事故。因此使用離心機時(shí),必須注意以下操作:
(1)離心機套管底部要墊棉花或試管墊。
(2)電動(dòng)離心機如有噪音或機身振動(dòng)時(shí),應立即切斷電源,及時(shí)排除故障。
(3)離心管必須對稱(chēng)放入套管中,防止機身振動(dòng),若只有一支樣品管另外一支要用等質(zhì)量的水代替。
(4)啟動(dòng)離心機時(shí),應蓋上離心機頂蓋后,方可慢慢
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