分光光度計的性能檢查

        (1)波長(cháng)校正：在更換光源燈、重新安裝、運輸或檢修后，或儀器不能正常工作時(shí)，使用光電比色計或分光光度計進(jìn)行波長(cháng)校正。對于正常工作的儀器，應每隔一個(gè)月檢查一次波長(cháng)，必要時(shí)應進(jìn)行校準，以確保波長(cháng)讀數與通過(guò)樣品的波長(cháng)和儀器的靈敏度一致。方法 常用的光譜釹濾光片校準法適用于721儀器可見(jiàn)光區的波長(cháng)校準。通常以 585nm 或 529nm 處的吸收峰或 T% 作為標準。鑒于721儀器的發(fā)射光波長(cháng)較寬，573nm和585nm兩個(gè)峰谷不容易分離，校準時(shí)容易出現誤差。因此，建議使用 529nm 處的峰值或谷值作為波長(cháng)校準的標準。校準時(shí)，根據需要預熱儀器。要求電源電壓穩定。將波長(cháng)板設置在580nm，將T%調到，在比色皿上放一張白紙，觀(guān)察是否有光強均勻的光斑，邊緣無(wú)光暈或雜散光。如果不符合要求，調整燈泡位置使之符合要求是對波長(cháng)校正的粗調。然后將靈敏度設置為“1"（zui低檔），將波長(cháng)刻度盤(pán)對準529nm，儀表機械零位為零，光路空白時(shí)將T%調整為100%T，檢查零點(diǎn)和100%T 反復穩定。將釹光譜濾光片插入光路中，緩慢旋轉波長(cháng)盤(pán)，找到透光率zui低的點(diǎn)（左右旋轉波長(cháng)盤(pán)時(shí)，該點(diǎn)的透光率值增加），這點(diǎn)是波長(cháng)529nm。檢查波長(cháng)盤(pán)的指示值是否為529nm，如果指示值為534nm，此時(shí)波長(cháng)誤差為5nm，如果超出規格（±1nm）必須調整。
        調整方法：將波長(cháng)盤(pán)對準529nm，從光路中取出光譜釹濾光片，在光路空白時(shí)將儀表指針調至100%T，然后將光譜釹濾光片插入光路。打開(kāi)儀器左側的小蓋，找到波長(cháng)校正螺絲（三個(gè)中與左手柄長(cháng)度相同的那個(gè)）；逆時(shí)針?lè )较蛘{整（負誤差為順時(shí)針?lè )较颍?，使儀表指針的T%zui低。反復檢查波長(cháng)誤差，直到符合儀器的技術(shù)指標。合上左邊的小蓋，校準結束。
        一些gao端儀器如島津UV-260雙光束分光光度計可以在測量比色池中使用氫燈或光譜釹濾光片。對濾光片掃描程序進(jìn)行編程后，儀器可在一定波長(cháng)范圍內自動(dòng)進(jìn)行波長(cháng)校正。gao端分光光度計的光學(xué)系統密封在一個(gè)單元組件中。如果出現故障，波長(cháng)不準，往往需要請廠(chǎng)家派人維修。還有其他方法如譜線(xiàn)校正法、干涉濾光片校正法和有色溶液校正法等，請參考相關(guān)資料。
         (2)線(xiàn)性檢查：線(xiàn)性檢查包括儀器線(xiàn)性和測量方法線(xiàn)性的檢查。線(xiàn)性誤差表現為溶液濃度與吸光度的非線(xiàn)性關(guān)系，存在正偏差或負偏差現象。這種偏差，根據比爾定律，來(lái)自?xún)蓚€(gè)方面：一是溶液本身不符合比爾定律，這種現象稱(chēng)為化學(xué)偏差；另一種是儀器本身的各種因素的影響，使得吸光度測量值與濃度的關(guān)系不是線(xiàn)性的，這種現象稱(chēng)為儀器偏差。這里研究后者。儀器偏差的因素很多，如雜散光、有限帶寬、檢測器噪聲、環(huán)境條件變化、波長(cháng)變化、比色皿誤差、輻射的非平行性以及檢測器本身的非線(xiàn)性等。
        儀器的線(xiàn)性檢查常使用已知在一定波長(cháng)和一定濃度范圍內服從比爾定律的有色物質(zhì)，并與不同濃度的溶液混合，檢查儀器本身是否能如實(shí)反映樣品的濃度變化。有色物質(zhì)。該檢驗方法與被測物質(zhì)的顏色反應等任何方法學(xué)問(wèn)題無(wú)關(guān)。根據濃度繪制測量的吸光度，理想情況下應該是一條直線(xiàn)。常用的方法是使用0.8、1.6、2.4、4.0 mg/L Evan Blue濃度系列進(jìn)行檢查，波長(cháng)為610nm。
         (3)雜散光(散光)檢測：在吸光度測量中，檢測器感覺(jué)到的所有不需要的輻射稱(chēng)為雜散光。雜散光對吸光度測量的準確性有嚴重影響，但往往被忽視。雜散光的來(lái)源包括： ①儀器本身的原因，如單色器的設計、光源的光譜分布、光學(xué)原件的老化程度、帶寬、儀器內部的反射和散射; ②室內光線(xiàn)過(guò)強漏光 儀器與儀器暗室蓋板不嚴密； ③樣品本身的原因，如樣品是否有熒光，樣品的散射能力等。
        雜散光檢測法： ① 10±0.1g/L碘化鈉溶液可用于紫外區雜散光監測，240nm處測吸光度應大于2.00。另外，也可用12g/Llu化鉀溶液測220nm處的透光率，即雜散光量，一般應小于1%T。以上所有測定均使用石英杯進(jìn)行，并用蒸餾水調零。 ②在可見(jiàn)光區可用光譜釹過(guò)濾器或硫酸鎳法檢查。先用光譜釹濾光片校準波長(cháng)，然后用黑紙擋住比色皿的光路（進(jìn)口儀器有比色皿狀的黑柱），然后調到0%T，再用空氣使空白調整到 100%T。插入光譜釹濾光片，在585nm處測量，測量值為雜散光級。
         (4)比色皿的質(zhì)量檢驗：比色皿一般由玻璃、石英或螢石制成，光徑為1.0或0.5cm。光線(xiàn)通過(guò)時(shí)，一部分光線(xiàn)因空氣與玻璃接觸面的反射而損失（4%），另一部分（很少）被玻璃吸收。除了比色杯的質(zhì)量，玻璃的厚度均勻，頂部和底部相同，杯子相互匹配。廠(chǎng)家一般供應四件套，杯口上部外側有一個(gè)箭頭，箭頭用在光源一側。盡管如此，在使用前應進(jìn)行質(zhì)量檢查。常用伊文藍法：將一定量的2.0mg/L伊文藍溶液倒入比色皿中，比色皿內液面應相等。以比色皿為標準，使用紅色濾光片（波長(cháng)600-610nm），用水校零后將這個(gè)杯子的讀數調整到50%T，然后讀取剩余杯子的透光率。透光率差在±0.5%T以?xún)日邽楹细瘛?/span>
         (5)穩定性檢驗：檢驗方法：將分光光度計及附件接0.5kVA以上可調變壓器，先調電壓220V，波長(cháng)固定在650nm，在光路比色杯中裝空白液調節時(shí)讀數為90%T，將電壓升到230V再降到190V，觀(guān)察透光率的漂移值。如果在88.5%～91.5%T之間，則為合格。在電源電壓恒定的情況下，3分鐘內讀數漂移不應超過(guò)刻度上限的±0.5%。
         (6) 重復性檢驗：在波長(cháng)、工作狀態(tài)、電源電壓、比色皿匹配等合格的前提下進(jìn)行重復檢驗。當由交流電源供電時(shí)，儀器重復測量的溶液讀數之間的差異應小于或等于刻度上限的 1%。測試方法：在120-150攝氏度下干燥分析純二絡(luò )合鉀2小時(shí)，并在干燥器中冷卻。稱(chēng)取509.1mg于1000ml容量瓶中，用蒸餾水溶解并加至刻度，混勻（此溶液為180mg/L鉻）。所用溶液為 30、60、180 毫克鉻/升。取波長(cháng)440nm，連續測量每個(gè)應用溶液的濃度管3-5次，濃度管中的一個(gè)誤差小于1%T為合格。
         (7)靈敏度檢查：將重鉻酸鉀溶液配制成30和32.5mg鉻/L和120和122.5mg/L鉻4個(gè)應用溶液(兩組鉻濃度差為2.5mg/L)。波長(cháng)為440nm，用水調零點(diǎn)，連續測定上述應用溶液的吸光度3次，兩組2.5mg/L鉻濃度差的吸光度差不小于0.01為合格